第423章成功(2 / 2)

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而最后一步,则是在里面找到报告基因。

报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说。是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达。从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。

在植物基因工程研究领域,已使用的报告基因有以下几种:胭脂碱合成酶基因nos、章鱼碱合成酶基因og2、o2和荧光素存在下发出荧光,这样就可用转基因植物整株或部分直接用x-光片或专门仪器进行检测。

在动物基因表达调控的研究中。报告基因也被广泛应用。常用的有氯霉素乙酰转移酶基因ug和荧光素二半乳糖苷fdg为底物则可用荧光法检测其活性。此法可检测单个细胞的酶活性,并可用于流式细胞学facs分析。如以二氧杂环丁烷为底物,可用化学发光法检测酶活性,其检测动力学范围最大,灵敏度最高,与用生物发光法检测荧光素酶活性的灵敏度相似。

荧光素酶是能够催化不同底物氧化发光的一类酶。哺乳细胞无内源性荧光素酶。最常用的荧光素酶有细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和renilla荧光素酶。细菌荧光素酶对热敏感,因此在哺乳细胞的应用中受到限制。萤火虫荧光素酶灵敏度高。检测线性范围宽达78个数量级,是最常用于哺乳细胞的报道基因。用荧光比色计即可检测酶活性,因而适用于高通量筛选。随着具有膜通透性和光裂解作用的萤火虫荧光素酶的应用,无需裂解细胞即可检测酶活性。renilla荧光素酶催化肠腔素氧化,产物可透过生物膜,可能是最适用于活细胞的报告分子。将荧光素酶报告基因载体转染到细胞中,可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。自1986年起,萤火虫荧光素酶基因被用作测定基因表达的报告基因,获得了广泛的应用ga公司的pgl3及pgl2系列载体,含sv40启动子及增强子的不同组合,有助于分析dna片段的转录活性。

“主人,成功了!”

不知道过了多久,墨莲人恭敬地对李安道。

李安满意地看着自己的身体,然后进入了这个躯体之中!未完待续

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